上海遠慕生物科技詳細為您介紹犬維生素K1(VK1)ELISA試劑盒的參數(shù)說明，操作步驟，注意事項，樣品收集等詳情，本司提供ELISA試劑盒免費代測服務(wù)，一周內(nèi)出結(jié)果，ELISA種屬有：大鼠ELISA檢測試劑盒，小鼠ELISA檢測試劑盒，人ELISA試劑盒，馬ELISA檢測試劑盒，羊ELISA檢測試劑盒，猴ELISA試劑盒，豬ELISA試劑盒，狗ELISA檢測試劑盒，植物ELISA試劑盒，猴ELISA試劑盒，其他動試劑盒，訂購!
【參數(shù)說明】
中文名：犬維生素K1(VK1)ELISA試劑盒
別名：犬維生素K1(VK1)ELISA Kit
供應(yīng)商：上海遠慕
規(guī)格：48t/96t
保存：2~8℃
有效期：6個月
樣本：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
特點：敏感性高、特異性強、重復性好、試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便。
用途：用于測定血清，血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。
種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。
檢測原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。
【操作步驟】
1、加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
2、溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
3、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
4、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復5次，拍干。
5、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
6、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘。
7、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
8、測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
【樣品收集】
1、血清：全血樣品于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。
2、血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂樣品。
3、組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果)，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
4、細胞培養(yǎng)上清：取細胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細胞碎片。取上清檢測。
5、其它生物樣品：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測
6、樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。
7、樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測)，或-80℃(6個月內(nèi)檢測)，避免反復凍融。
8、如果您的樣品中檢測物濃度高于標準品zui高值，請根據(jù)實際情況，做適當倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實驗，以確定稀釋倍數(shù))。
【注意事項】
1、實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
2、試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。
3、使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
4、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
5、洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
6、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
7、加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
8、按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
9、底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子，底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下，避免用手接觸，有毒，實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
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