淀粉酶和蔗糖酶專一性的測(cè)定
 

　　一、目的和要求
 

　　1.了解酶的特異性。
 

　　2.掌握檢查酶的特異性的方法及其原理。
 

　　二、原理
 

　　酶是一種生物催化劑，它與一般催化劑主要的區(qū)別是酶具有高度的特異性(即專一性)。所謂特異性指的是一種酶只能對(duì)一種化合物或一類化合物(通常在這些化合物的結(jié)構(gòu)中具有相同的化學(xué)健)起一定的催化作用，而不能對(duì)別的物質(zhì)發(fā)生催化反應(yīng)。例如：淀粉酶能催化淀粉水解，但不能催化脂肪水解。而脂肪酶則能催化脂肪水解，卻不能催化淀粉水解。
 

　　本實(shí)驗(yàn)以唾液酶(合淀粉酶及少量麥芽糖酶)和蔗糖酶(蔗糖酶是一種水解酶，它能使蔗糖水解為果糖和葡萄糖)對(duì)淀粉和蔗糖的作用為例，說明酶的特異性。
 

　　三、試劑和器材
 

　　1、試劑
 

　　(1)2%蔗糖溶液：蔗糖是典型的非還原糖，若商品蔗糖中還原糖含量超過一定標(biāo)準(zhǔn)，則呈現(xiàn)還原性，這種蔗糖不能使用。所以，實(shí)驗(yàn)前必須進(jìn)行檢查。本實(shí)驗(yàn)用的蔗糖至少應(yīng)是分析純的試劑。
 

　　(2)0.3%氯化鈉的1%淀粉溶液(新鮮配制)
 

　　(3)稀釋200倍的新鮮唾液
 

　　(4)蔗糖酶溶液：取干酵母100克，置于乳缽內(nèi)，添加適量蒸餾水及少量石英砂。用力凍融法研磨提取，然后加蒸餾水，使總體積約為500毫升，過濾。將濾液保存于冰箱內(nèi)備用。
 

　　(5)本尼迪克特試劑：將硫酸銅17.3克溶解于100毫升熱蒸餾水中。冷卻后，稀釋至150毫升。取檸檬酸鈉173克及碳酸鈉(NaCO3.H2O)100克，加水600毫升，加熱使之溶解，冷后，稀釋至850毫升。后，把硫酸銅溶液緩緩傾入檸檬酸鈉-碳酸鈉溶液中。混勻后，用細(xì)口瓶貯存。此試劑可保存很久。
 

　　2、器材
 

　　(1)試管及試管架 (2)試管夾
 

　　(3)玻璃漏斗 (4)量筒(100毫升)
 

　　(5)燒杯(100毫升) (6)錐形瓶(100毫升)
 

　　(7)吸量管(1、2、5、10毫升) (8)恒溫水浴
 

　　(9)電爐 (10)濾紙
 

　　四、操作步驟
 

　　1、淀粉酶的特異性實(shí)驗(yàn)
 

　　取 2支試管，各加入本尼迪克特(Benedict)試劑 2毫升，再分別加入1%淀粉溶液或2%蔗糖溶液各4滴?；旌暇鶆蚝?，放在沸水浴中煮2—3分鐘。觀察有無紅黃色沉淀產(chǎn)生，純凈的淀粉和蔗糖不呈陽(yáng)性反應(yīng)。
 

　　再取3支試管，每管各加入稀釋200倍的新鮮唾液1毫升。再分別加水、1%淀粉溶液或2%蔗糖溶液各3毫升。混勻，放入37℃恒溫水浴中保溫，15分鐘后取出。各加本尼迪克特試劑2 毫升，搖勻，放在沸水浴中煮2—3分鐘。觀察有無紅黃色沉淀產(chǎn)生。
 

　　應(yīng)該指出，關(guān)于新鮮唾液的稀釋倍數(shù)，一般為200倍。但是，由于不同人或同一人不同時(shí)間采收的唾液內(nèi)淀粉酶的活性并不相同，有時(shí)差別很大，稀釋倍數(shù)可以是50—300倍，甚至超出此范圍。因此，應(yīng)事先確定稀釋倍數(shù)。另外，要注意除去唾液里的氣泡，避免稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)確而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。稀釋好的新鮮唾液用濾紙過濾后待用。
 

　　2、蔗糖酶的特異性實(shí)驗(yàn)
 

　　取2支試管，各加入蔗糖酶溶液1毫升，再分別加入1%淀粉溶液3毫升或2%蔗糖溶液3毫升。搖勻，放入37℃恒溫水浴中保溫，10分鐘后取出，各加入本尼迪克特試劑2毫升，混勻后放入沸水浴中煮2—3分鐘。觀察有無紅黃色沉淀產(chǎn)生。
 

　　再取1支試管，加入蔗糖酶1毫升和蒸餾水3毫升，混勻，加人本尼迪克特試劑2毫升，搖勻，在沸水浴中煮2—3分鐘?？梢杂^察到試管內(nèi)溶液呈現(xiàn)輕度陽(yáng)性反應(yīng)，這是由于蔗糖酶溶液本身含有少量還原性雜質(zhì)的緣故。因此，用此管作為對(duì)照，即可解釋上述用淀粉作底物的試管內(nèi)呈現(xiàn)輕度陽(yáng)性反應(yīng)的原因。