*，使用混合穩(wěn)定株可以獲得多個不同的單克隆穩(wěn)定細胞株。因為穩(wěn)定整合往往伴隨著插入失活宿主內(nèi)源基因，所以實驗時通過使用混合穩(wěn)定靠譜的細胞株，或者對多個單克隆穩(wěn)定細胞株進行比較，可以幫助研究人員獲得更的實驗數(shù)據(jù)。篩選穩(wěn)定細胞株主要有三類方法：

1：單克隆環(huán)法

此類方法多用于整合率低的轉(zhuǎn)染方法或者需要得到單克隆細胞株的實驗。其優(yōu)點在于工作量小，只需將轉(zhuǎn)染或者病毒載體感染后的細胞按照一定的細胞密度轉(zhuǎn)移至新皿中，并使用合適的藥物進行篩選，后在克隆環(huán)的幫助下對單克隆細胞株進行挑選，并在新皿中完成擴增。

2：96孔單克隆稀釋法

此類方法同樣多用于整合率低的轉(zhuǎn)染方法或者需要得到單克隆細胞株以及篩選懸浮細胞穩(wěn)定株的實驗。其優(yōu)點在于，理論上可以得到非常均一的單克隆，同時可以篩選懸浮細胞穩(wěn)定株。其缺點在于，工作量比較大。

3：逆轉(zhuǎn)錄病毒混合克隆制備法

此類方法適用于需要制備混合穩(wěn)定細胞株。優(yōu)點在于可以在短時間內(nèi)獲得穩(wěn)定細胞株，同時也可以隨時將細胞稀釋轉(zhuǎn)移至新皿中獲得單克隆細胞株。傾向于整合于轉(zhuǎn)錄起始位點附近的，容易造成下游基因的激活;而整合于轉(zhuǎn)錄活躍基因內(nèi)的，容易導(dǎo)致整合區(qū)基因的插入失活。

總而言之，對于需要對細胞密度和藥物濃度繪制致死曲線并選取合適的細胞密度和藥物濃度進行篩選，一些細小的密度和濃度差別都會影響獲取均一的單克隆細胞株，影響獲取的克隆不純，國內(nèi)資深的細胞株含有非整合的細胞。穩(wěn)定整合的細胞在這樣一類混合細胞中，不會失去生長優(yōu)勢。