微生物EM（環(huán)境監(jiān)測(cè)）檢測(cè)中最常遇到的問(wèn)題之一與培養(yǎng)策略和培養(yǎng)基的選擇有關(guān)。

使用一種培養(yǎng)基（TSA）或者兩種培養(yǎng)基（TSA和SDA），使用單個(gè)溫度、兩個(gè)溫度，是否從低溫到高溫，還是高溫到低溫。影響微生物回收率的因素有：結(jié)果觀察時(shí)間(單一溫度通常比兩個(gè)溫度早)、成本(只用TSA比使用TSA+SDA便宜)以及微生物回收率的高低。很少有研究報(bào)告回收率相關(guān)的培養(yǎng)條件選擇，但是，已有報(bào)告單一溫度條件30-35℃培養(yǎng)對(duì)于霉菌回收的不如兩個(gè)溫度培養(yǎng)的好。下面的數(shù)據(jù)總結(jié)了在我們實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的一項(xiàng)小研究。

采用標(biāo)準(zhǔn)TSA LP80培養(yǎng)基、分別使用30-35℃@5天、25-30℃@5天、20-25℃@72小時(shí)+30-35℃@48小時(shí)3種方案進(jìn)行評(píng)價(jià)。以SDA培養(yǎng)基20-25℃@5天條件為對(duì)照，對(duì)霉菌的回收情況進(jìn)行評(píng)價(jià)。

這些樣本是從生產(chǎn)車(chē)間入口附近的非受控區(qū)域采集的，以確保足夠高的計(jì)數(shù)以獲得合適的數(shù)據(jù)大小。在每個(gè)地點(diǎn)取3個(gè)表面接觸皿和1個(gè)浮游菌(1立方SAS180)，每天取12個(gè)點(diǎn)。每個(gè)點(diǎn)取3組重復(fù)樣本，每個(gè)培養(yǎng)溫度測(cè)試1組樣品。實(shí)驗(yàn)2中還收集了SDA樣本。樣本分別在12月至1月，以及9個(gè)月后的8月至9月采集，以覆蓋季節(jié)變化。培養(yǎng)后對(duì)每組樣品進(jìn)行計(jì)數(shù)，以確定菌落計(jì)數(shù)。在實(shí)驗(yàn)2中，三位分析員還計(jì)算了每個(gè)組的霉菌菌落數(shù)，并計(jì)算了每個(gè)樣本的平均值。

圖1、在試驗(yàn)1的3天內(nèi)，在每種培養(yǎng)策略下檢測(cè)到的細(xì)菌菌落總數(shù)

圖2、在試驗(yàn)2的8月至9月的3天內(nèi)，在每種培養(yǎng)策略下檢測(cè)到的細(xì)菌菌落總數(shù)

總的來(lái)說(shuō)，25-30℃的單一溫度日變化最小，可能比其他2種方法回收了更多的菌落。這種類(lèi)型的測(cè)試存在相當(dāng)大的差異，因此需要研究更大的面以獲得更可靠的數(shù)據(jù)集。

霉菌檢測(cè)

在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，每個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)霉菌菌落的發(fā)生頻率都被記錄下來(lái)。結(jié)果如圖3所示。正如我們所看到的那樣，SDA（22.5℃）回收了大部分的菌落，組合溫度（25-30℃+30-35℃）次之，然后是25-30℃，最后是30-35℃。在30-35℃條件下，回收率小于SDA（22.5℃）的1%。

圖3.在3天的試驗(yàn)中，每種培養(yǎng)策略檢測(cè)到的霉菌菌落總數(shù)

總結(jié)

如果成本是驅(qū)動(dòng)因素，那么單一培養(yǎng)基，組合溫度培養(yǎng)(從低到高)的TSA是*。如果速度是主要的要求，那么25-30℃的單一溫度是最/好的。如果需要全部回收，那么優(yōu)選2種培養(yǎng)基，TSA和SDA。