隨著疫情的常態(tài)化，大家越來越熟悉新/冠核酸檢測。新/冠核酸快速檢測是新/冠病毒檢測“金標(biāo)準(zhǔn)"，可是對(duì)于檢驗(yàn)人來說，這個(gè)金標(biāo)準(zhǔn)可不簡單，眾所/周知PCR檢測技術(shù)本來就屬于高技術(shù)檢測。再加上新/冠核酸檢測的特殊性，對(duì)標(biāo)本的檢測帶來巨大困難，隨之而來的就是各種假陽性、假陰性的結(jié)果。那么如何解決這些問題就成為檢驗(yàn)人的一個(gè)難題。其實(shí)如果我們對(duì)PCR檢測了解多一些，其實(shí)這些問題是可以避免的。

一、假陰性結(jié)果原因

試劑質(zhì)量：試劑比對(duì)、性能驗(yàn)證、批間差等

檢測試劑：靈敏度

提取試劑：提取效率

標(biāo)本因素

標(biāo)本類型：肺泡灌洗液、痰液、鼻拭子、咽拭子、肛拭子等。

標(biāo)本采集：采樣不規(guī)范、部位不當(dāng)、采集標(biāo)本中被感染的細(xì)胞太少或沒有。

標(biāo)本保存、運(yùn)輸與處理：室溫放置不超過4小時(shí)，應(yīng)在2-4小時(shí)內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。長途運(yùn)輸應(yīng)采用干冰等制冷方式保存。24小時(shí)未檢測的樣本應(yīng)置于-70℃保存，新/冠病毒RNA病毒靶基因降解對(duì)于RNA樣品影響更加嚴(yán)重。

人員操作：采樣、核酸提取、結(jié)果解讀、問題分析糾正以及質(zhì)量控制等。

二、如何避免假陰性措施

1、要保證試劑的質(zhì)量，必須建立試劑驗(yàn)證嚴(yán)格的SOP文件，每一批次的試劑比對(duì)、性能驗(yàn)證必須認(rèn)真完成并形成書面報(bào)告已備溯源。

2、重癥以及危重癥患者應(yīng)該首/選肺泡灌洗液以及痰液。普通篩查最好選用鼻拭子。

3、操作人員一定選用技術(shù)能力合格，身體健康，心理素質(zhì)較好的工作人員。

4、核酸提取應(yīng)該嚴(yán)格執(zhí)行sop，符合試劑說明書要求，Sop建立必須科學(xué)具有操作性。

5、科學(xué)規(guī)范采樣。

6、規(guī)范送檢，合理時(shí)間檢測可以有效預(yù)防假陰性。

7、PCR抑制物是造成假陰性的重要原因，所以實(shí)驗(yàn)室盡量不存放與實(shí)驗(yàn)無關(guān)物品，安全柜應(yīng)該無多余物品。吸頭選用去RNA酶的產(chǎn)品。

三、假陽性結(jié)果原因

陽性質(zhì)控品交叉污染

強(qiáng)陽性標(biāo)本交叉污染

擴(kuò)增產(chǎn)物污染

四、如何避免假陽性措施

1、如果2份假陽性樣本均在陽性質(zhì)控管附近，可以推測是加樣操作不當(dāng)引起。

2、某一批檢測結(jié)果出現(xiàn)多個(gè)陽性結(jié)果，而且復(fù)檢仍為陽性，但是在其它機(jī)構(gòu)檢測為陰性。這種結(jié)果多為樣本中有一個(gè)強(qiáng)陽性，因?yàn)椴僮魅藛T操作不當(dāng)導(dǎo)致后續(xù)樣本全為陽性，因?yàn)槭窃紭颖疚廴荆詮?fù)檢也為陽性。

3、實(shí)驗(yàn)人員在常規(guī)篩查中發(fā)現(xiàn)單靶標(biāo)陽性，工作環(huán)境檢測也能檢測到，該情況多為擴(kuò)增產(chǎn)物污染，該情況出現(xiàn)多為工作人員無分區(qū)概念，擴(kuò)增區(qū)沒有嚴(yán)格進(jìn)行消毒造成高濃度擴(kuò)增產(chǎn)物被帶入到提取實(shí)驗(yàn)區(qū)，引起的假陽性。

（上述情況均可以通過分區(qū)操作、嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)室清潔消毒、加強(qiáng)操作人員的操作規(guī)范性避免。）

4、嚴(yán)格執(zhí)行三份陰性樣本隨機(jī)放在臨床樣本中參與整個(gè)提取擴(kuò)增過程的質(zhì)控策略。

5、擴(kuò)增八連管的蓋子一定要蓋嚴(yán)以防泄露。

引起假陽性和假陰性的原因有很多，作為檢驗(yàn)人應(yīng)該嚴(yán)格執(zhí)行SOP，提高實(shí)驗(yàn)人員的檢驗(yàn)技能，把每個(gè)環(huán)節(jié)都落實(shí)到實(shí)處，真正做到“做你所寫，寫你所做"，那么我們的檢驗(yàn)報(bào)告將非常科學(xué)公正。同時(shí)在全面抗擊疫情中展現(xiàn)出檢驗(yàn)工作人員科學(xué)、專業(yè)、敬業(yè)的精神面貌。